產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
快速 HSA/IgG 清除試劑盒
|
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
|
|
|
BF101 |
BcMag? 快速 HAS 和 IgG 清除試劑盒 |
25x次 |
|
|
|
BF102 |
BcMag? 快速 HAS 和 IgG清除試劑盒 |
100x 次 |
|
|
產(chǎn)品特性 |
|
|
組成 |
表面連接有專有化學(xué)基團(tuán)的，改性的磁珠 |
|
磁力大小 |
~60 EMU/g |
|
磁力類型 |
超順磁性 |
|
有效密度 |
2.5 g/ml |
|
濃度 |
30 mg/ml (超純水 ) |
|
結(jié)合能力 |
10μl serum /20μl of Beads |
|
儲(chǔ)存條件 |
收到后，4°C保存 |
血清和血漿經(jīng)常用于臨床和藥物蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，用來(lái)發(fā)現(xiàn)治療靶點(diǎn)的早期診斷生物標(biāo)志物。對(duì)于這些體液生物我們可以非常容易的，無(wú)創(chuàng)獲得，但它們其中含有一些大量的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)，會(huì)掩蓋了少量存在的需要研究的蛋白質(zhì)成分。發(fā)現(xiàn)血清生物標(biāo)志物的問(wèn)題在于，如何清除大量不管蛋白的影響，同時(shí)發(fā)現(xiàn)和富集低豐度的蛋白質(zhì)。大量表達(dá)的蛋白質(zhì)，如白蛋白和IgG，占血清/血漿總蛋白質(zhì)的70%。而蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物的含量則要低得多（pg/ml）。高豐度蛋白質(zhì)會(huì)隱藏需要研究的低豐度蛋白質(zhì)，對(duì)一維和二維電泳、高效液相色譜和質(zhì)譜分析等分析實(shí)驗(yàn)造成影響。高豐度蛋白質(zhì)必須有效、可重復(fù)并明確地從血液樣本中去除掉，才可以正確的檢測(cè)低豐度蛋白質(zhì)。因此，在進(jìn)行蛋白質(zhì)組分析之前，特別是使用質(zhì)譜法時(shí)，有必要從人體樣品（如血漿、血清、尿液或腦脊液）中選擇性去除白蛋白。
雖然親合染料配體Cibacron Blue F3GA可以共價(jià)結(jié)合到商用載體上，用于從水溶液和人血漿中吸附HSA，但它的選擇性結(jié)合能力較差。在免疫親和系統(tǒng)中，也使用抗白蛋白抗體對(duì)HSA進(jìn)行結(jié)合。蛋白A通常用于去除IgG。這些技術(shù)通常具有較好的特異性，但成本高昂。此外，由于這些方法中有許多是基于瓊脂糖樹脂或其衍生結(jié)合柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因此，它們富集含量較低的蛋白質(zhì)的過(guò)程非常耗時(shí)，無(wú)法在短時(shí)間內(nèi)處理大量樣品，并且難以適應(yīng)自動(dòng)化系統(tǒng)。同時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，有時(shí)需要增加樣品體積來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，這就需要額外的蛋白質(zhì)濃縮步驟。這就需要具有提高效率、均勻性和吞吐量的，新白蛋白去除方法來(lái)解決上述問(wèn)題。
BcMag? Quick HSA/IgG Depletion Kit是基于我們獨(dú)特的磁珠，經(jīng)過(guò)我們專有的化學(xué)修飾，可快速簡(jiǎn)便地從血清和血漿樣品中去除白蛋白和IgG。在特定緩沖液條件下，磁珠與樣品中的所有其他蛋白質(zhì)（白蛋白和IgG除外）結(jié)合，并可以通過(guò)結(jié)合和釋放除白蛋白以外的所有含量較低的蛋白質(zhì)，達(dá)到去除白蛋白和IgG目的。 富集和洗脫下來(lái)的蛋白質(zhì)可用于下游應(yīng)用，如蛋白質(zhì)組分析、生物標(biāo)志物檢測(cè)、酶分析、SELDI分析、蛋白質(zhì)陣列像素化、1維和2維凝膠電泳、LC/MS和MALDI-TOF MS。
工作流程（圖1）
如圖1所示，白蛋白清除試劑盒的操作流程非常簡(jiǎn)單。將磁珠與血清或血漿樣品混合，并連續(xù)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。在混合期間，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，這樣就使樣品中的所有其他蛋白質(zhì)（白蛋白和IgG除外）可以充分結(jié)合到磁珠上。孵育后，收集磁珠，使用磁力分離器從樣品中將磁珠分離出來(lái)。然后洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
l 快速、簡(jiǎn)單、無(wú)需純化柱、離心機(jī)或過(guò)濾器。
l 去除90%以上的白蛋白和95%的 IgG
l 高通量：在30分鐘內(nèi)快速處理多達(dá)96個(gè)樣品
l 低豐度蛋白富集效果相當(dāng)于或者優(yōu)于 hexapeptides 或者 antibodies
l 溫和的洗脫條件保留了蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)，并允許輕松的轉(zhuǎn)移到二級(jí)結(jié)構(gòu)分析。
l 可根據(jù)需求調(diào)整試驗(yàn)樣品體積大小，便與自動(dòng)化操作。
l 最小的樣品稀釋程度
適用于LC-MS、基于活性的蛋白質(zhì)分析和蛋白質(zhì)組學(xué)研究。
操作協(xié)議
提示：
· 以下協(xié)議僅是一個(gè)示例。血清中的蛋白質(zhì)濃度可能不同。10ul人血清含有約700μg的完整蛋白質(zhì)。這些蛋白中，約70%為人血清白蛋白。每個(gè)實(shí)驗(yàn)中使用的血清量應(yīng)由用戶優(yōu)化。系統(tǒng)過(guò)載可能導(dǎo)致白蛋白被攜帶到低豐度蛋白質(zhì)組分中。使用給定的方案，用戶在試驗(yàn)時(shí)可清除掉50-100g血清蛋白。
· 樣品在含鹽緩沖液中洗脫，可能需要在電泳或質(zhì)譜分析之前進(jìn)行脫鹽。但是，如果樣品在分析前已經(jīng)充分稀釋，則可能不需要脫鹽。
材料要求
l BcMag? Quick Albumin Removal magnetic beads
l 1x Binding/Washing Buffer: 20 mM 磷酸鈉, pH 6.5,
l 1x Elution Buffer: 100 mM甘氨酸-HCl, pH 2.7
儀器要求
|
Item |
Source |
|
|
磁力分離器
**根據(jù)樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個(gè)單獨(dú)的50毫升離心管，1個(gè)單獨(dú)的15毫升離心管, 以及4個(gè) 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
|
|
|
BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
|
|
可調(diào)單通道和多通道移液器 |
|
|
|
擺斗離心機(jī) |
|
|
|
如果使用96孔PCR板/管，則需要添加項(xiàng)目 |
||
|
渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號(hào)的渦懸混合器。但是，時(shí)間和速度應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化，并且混合器應(yīng)滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉(zhuǎn)速 ≥ 2000 rpm |
||
|
Eppendorf? MixMate? |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
|
|
Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
|
|
Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24?×?1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
|
|
Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
|
|
1.5/2.0 mL 離心管 |
||
|
96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
||
|
PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，確保PCR管或PCR板錐形部分底部的井徑必須≥2.5毫米。 |
||
操作過(guò)程
提示
l 用力震蕩試劑瓶，直到磁珠變得均勻。
l 在分液前，不要讓磁珠靜置超過(guò)5分鐘。
1. 將40μl磁珠轉(zhuǎn)移到新試管或新的96孔PCR板、微孔板或0.2ml PCR管中，并將50μl的 binding buffer添加到反應(yīng)管中，使最終反應(yīng)體積為90μl。
2. 添加10μl血清樣品，通過(guò)緩慢上下移液20-25次將樣品與磁珠混合，或以2000 rpm旋轉(zhuǎn)樣品5min（見圖）。
3. 將反應(yīng)的反應(yīng)板/試管放在磁力分離器上30s或直到溶液澄清。
4. 將反應(yīng)管保留在磁力分離器上的同時(shí)，去掉上清液。
5. 用100μL的binding buffer清洗磁珠，通過(guò)緩慢上下移液20-25次，或以2000 rpm旋轉(zhuǎn)樣品2分鐘的方式。將反應(yīng)的反應(yīng)板/試管放在磁力分離器上30s或直到溶液澄清。
6. 重復(fù)步驟5一次
7. 將磁珠重新懸浮在50-100μl的Elution Buffer中，通過(guò)緩慢上下移液20-25次將樣品與磁珠混合，或以2000 rpm旋轉(zhuǎn)樣品5分鐘。
8. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的微量離心管或微量滴定板中。含有目標(biāo)蛋白的上清液即可用于下游應(yīng)用。
