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分泌型His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒

運(yùn)輸條件: 常溫運(yùn)輸

儲(chǔ)存條件: 在4oC儲(chǔ)存試劑盒.

簡介

BcMag? 分泌型His標(biāo)簽蛋白質(zhì)純化試劑盒是基于磁珠和一種獨(dú)特的、專有的負(fù)載鎳離子的配體合成的一個(gè)試劑盒。磁珠上配體的結(jié)合非常牢固，而且對(duì)His標(biāo)簽蛋白質(zhì)具有極高親和力，即使在含有化學(xué)添加劑如螯合劑（EDTA）、強(qiáng)還原劑（DTT）或細(xì)胞培養(yǎng)上清液的組分的情況下也不會(huì)出現(xiàn)金屬離子浸出現(xiàn)象，盡管，這些化學(xué)添加劑具有剝離Ni離子并降低大多數(shù)IMAC磁珠作用的功能。His簽蛋白質(zhì)純化磁珠可以直接從可溶性細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取物、HeLa、CHO哺乳動(dòng)物細(xì)胞或Sf9昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)上清液中有效純化His標(biāo)簽重組蛋白質(zhì)。它們可以配合手動(dòng)與磁性分離器使用，也可以與自動(dòng)化儀器配合使用。它避免了大量耗時(shí)的樣品預(yù)處理過程，例如通過透析和濃縮操作進(jìn)行緩沖液交換。

磁珠產(chǎn)品與傳統(tǒng)色譜法如純化柱、瓊脂糖或非磁性樹脂相比具有顯著優(yōu)勢(shì)?；诖胖榈奶匦?span>可以在約20分鐘內(nèi)快速高產(chǎn)率處理96個(gè)樣品，重組蛋白可達(dá)到85%以上的純度。當(dāng)使用基于色譜柱的技術(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，在科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室處理多個(gè)樣品時(shí)，可能需要大量的手動(dòng)移液操作。這種移液操作會(huì)造成實(shí)驗(yàn)和人之間目標(biāo)生物分子產(chǎn)量的差異。實(shí)驗(yàn)人員和學(xué)生可能需要大量的培訓(xùn)和實(shí)踐才能產(chǎn)生恒定的蛋白質(zhì)產(chǎn)量。而且磁珠具有許多優(yōu)點(diǎn)，例如它們易于使用，快速的實(shí)驗(yàn)方案，適用性以及高通量自動(dòng)化和小型化處理的便利性等。

操作流程

用磁性微粒進(jìn)行蛋白純化的操作過程非常簡單（圖1）。只需要將磁性微粒與細(xì)胞裂解物混合，并連續(xù)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)足夠時(shí)間。在混合過程中，保持磁珠懸浮在樣品溶液中，使目標(biāo)蛋白質(zhì)與被固定的配體充分結(jié)合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分離器將磁珠從樣品中分離。然后，用過含咪唑的洗脫緩沖液洗脫下純化后的His標(biāo)簽的重組蛋白。

優(yōu)勢(shì)及特點(diǎn)

l 磁珠表現(xiàn)出比多孔載體更少的非特異性結(jié)合率。

l 穩(wěn)定的共價(jià)鍵，最少的配體泄漏

l 在含有高達(dá)20mM EDTA和20mM還原試劑的情況下，磁珠不會(huì)發(fā)生鎳離子浸出現(xiàn)象。

l 與細(xì)胞培養(yǎng)基中過量表達(dá)、或分泌蛋白的純化兼容。

l 極高的蛋白純度

l 性價(jià)比高：無需使用純化柱、過濾器、有機(jī)試劑或進(jìn)行重復(fù)移液。

l 高通量：與許多不同的自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)兼容。

產(chǎn)品應(yīng)用

l 研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能

l X射線晶體學(xué)的重組蛋白的制備

l 是研究蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)或DNA相互作用的理想選擇材料

l 在免疫研究中，提高抗體與對(duì)應(yīng)蛋白的結(jié)合和能力

l 即使使用粗細(xì)胞裂解液，也能有效篩選出表達(dá)的蛋白質(zhì)

l GST標(biāo)簽蛋白的微量純化

背景信息

多聚組氨酸標(biāo)簽，也稱為6xHis標(biāo)簽，和His標(biāo)簽，是從各種表達(dá)系統(tǒng)（包括細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)）中純化重組蛋白的通用工具。該標(biāo)簽是位于重組蛋白的N或C末端的包含六個(gè)或更多個(gè)連續(xù)組氨酸的殘基。由于這個(gè)氨基酸鏈體積非常小，His標(biāo)簽具有幾個(gè)獨(dú)特的特性，包括較少的免疫原性、親水性以及可在天然和變性條件下都可發(fā)揮作用的用途廣泛性。此外，不需要從重組蛋白上切割標(biāo)簽，因?yàn)樗粫?huì)干擾其融合蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。His標(biāo)簽的純化原理基于固定化金屬離子親和層析（IMAC）。

固定化金屬離子親和層析（IMAC）是一種快速的親和純化層析技術(shù)，是基于攜帶his標(biāo)簽的重組蛋白質(zhì)對(duì)Ni²⁺或Co²⁺的親和力從而達(dá)到分離目的，而Ni²⁺或Co²⁺則被結(jié)合固定到固相基質(zhì)表面，例如珠狀瓊脂糖或純化柱。在pH 7-8時(shí)，His標(biāo)簽蛋白將與Ni2+或Co2+結(jié)合。His標(biāo)簽重組蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)受到各種自變量的影響，如pH、溫度、鹽類型、鹽濃度、固定化的金屬和配體密度以及蛋白質(zhì)大小。可通過降低pH梯度、增加咪唑濃度或在緩沖液中加入EDTA螯合劑來洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。該技術(shù)是快速、直接捕獲和純化帶標(biāo)簽重組蛋白的，高性價(jià)比的理想工具。

盡管IMAC是一種非常有效的蛋白質(zhì)純化技術(shù)，但這種技術(shù)主要用于傳統(tǒng)的親和層析基質(zhì)，如瓊脂糖樹脂或純化柱。使用這些固體基質(zhì)進(jìn)行純化過程非常繁瑣、耗時(shí)，無法處理體積非常微小的樣品，并且難以適應(yīng)自動(dòng)化系統(tǒng)。因此，我們研發(fā)出了一種非常有效的磁珠IMAC分離產(chǎn)品來克服這些限制。

相關(guān)文獻(xiàn)

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