產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
IDA-His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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MHN101 |
BcMag? IDA-Ni His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒 |
5 ml |
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MHN102 |
BcMag? IDA-Ni His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒 |
10 ml |
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MHN103 |
BcMag? IDA-Ni His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒 |
50 ml |
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MHO101 |
BcMag? IDA-Co His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒 |
5 ml |
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MHO102 |
BcMag? IDA-Co His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒 |
10 ml |
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MHO103 |
BcMag? IDA-Co His-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒 |
50 ml |
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產(chǎn)品屬性 |
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組成 |
表面連接有 Ni2+ 或者 Co2+磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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濃度 |
100 mg/ml (1% NiSO4.6H2O or 1% CoCl26H2O) |
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結(jié)合能力 |
>2mg His-標(biāo)簽 GFP /ml 磁珠 |
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儲存 |
儲存在 4°C |
運(yùn)輸條件: 常溫運(yùn)輸
儲存條件: 在4oC儲存試劑盒.
簡介
BcMag? IDA 磁珠是直徑為5μm，高度均勻的，表面共價連接有高密度IDA（亞氨基二乙酸酯）基團(tuán)的IMAC磁性微球。它被設(shè)計用于從各種類型生物樣品中捕獲和純化帶有組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白質(zhì)。該微球結(jié)合了IMAC蛋白純化的所有優(yōu)點(diǎn)（（成本低、操作簡單、高特異性和大容量）和磁性，在使用手動操作或自動化快速高通量純化操作過程都適用。Bioclone公司生產(chǎn)出兩種帶不同離子的IDA磁珠用于His-tag蛋白純化；BcMag? IDA-Ni2+磁珠和BcMag? IDA-Co2+磁珠。目前，最常用的蛋白純化金屬離子是鎳離子（Ni2+）用于His標(biāo)簽融合蛋白的純化，因?yàn)樗哂袠O高的結(jié)合量，而鈷離子（Co2+）可以提供純化蛋白更高的純度，但蛋白結(jié)合量較低。
Workflow
用磁性微粒進(jìn)行蛋白純化的操作過程非常簡單（圖1）。只需要將磁性微粒與細(xì)胞裂解物混合，并連續(xù)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)足夠時間。在混合過程中，保持磁珠懸浮在樣品溶液中，使目標(biāo)蛋白質(zhì)與被固定的配體充分結(jié)合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分離器將磁珠從樣品中分離。然后，用過含咪唑的洗脫緩沖液洗脫下純化后的His標(biāo)簽的重組蛋白。
優(yōu)勢及特點(diǎn)
l 快捷，簡單的一步法高通量操作;無需純化柱或過濾器，或重復(fù)移液、離心等操作。
l 穩(wěn)定的共價鍵，最少的配體泄漏
l 極高結(jié)合能力，非常低的非特異性結(jié)合率
l 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件對樣品體積進(jìn)行調(diào)整，便于自動化操作
l 產(chǎn)品重復(fù)效果好
產(chǎn)品應(yīng)用
l 研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能
l X射線晶體學(xué)的重組蛋白的制備
l 是研究蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)或DNA相互作用的理想選擇材料
l 在免疫研究中，提高抗體與對應(yīng)蛋白的結(jié)合和能力
l 即使使用粗細(xì)胞裂解液，也能有效篩選出表達(dá)的蛋白質(zhì)
l GST標(biāo)簽蛋白的微量純化
背景信息
多聚組氨酸標(biāo)簽，也稱為6xHis標(biāo)簽，和His標(biāo)簽，是從各種表達(dá)系統(tǒng)（包括細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)）中純化重組蛋白的通用工具。該標(biāo)簽是位于重組蛋白的N或C末端的包含六個或更多個連續(xù)組氨酸的殘基。由于這個氨基酸鏈體積非常小，His標(biāo)簽具有幾個獨(dú)特的特性，包括較少的免疫原性、親水性以及可在天然和變性條件下都可發(fā)揮作用的用途廣泛性。此外，不需要從重組蛋白上切割標(biāo)簽，因?yàn)樗粫蓴_其融合蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。His標(biāo)簽的純化原理基于固定化金屬離子親和層析（IMAC）。
固定化金屬離子親和層析（IMAC）是一種快速的親和純化層析技術(shù)，是基于攜帶his標(biāo)簽的重組蛋白質(zhì)對Ni2+或Co2+的親和力從而達(dá)到分離目的，而Ni2+或Co2+則被結(jié)合固定到固相基質(zhì)表面，例如珠狀瓊脂糖或純化柱。在pH 7-8時，His標(biāo)簽蛋白將與Ni2+或Co2+結(jié)合。His標(biāo)簽重組蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)受到各種自變量的影響，如pH、溫度、鹽類型、鹽濃度、固定化的金屬和配體密度以及蛋白質(zhì)大小。可通過降低pH梯度、增加咪唑濃度或在緩沖液中加入EDTA螯合劑來洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。該技術(shù)是快速、直接捕獲和純化帶標(biāo)簽重組蛋白的，高性價比的理想工具。
盡管IMAC是一種非常有效的蛋白質(zhì)純化技術(shù)，但這種技術(shù)主要用于傳統(tǒng)的親和層析基質(zhì)，如瓊脂糖樹脂或純化柱。使用這些固體基質(zhì)進(jìn)行純化過程非常繁瑣、耗時，無法處理體積非常微小的樣品，并且難以適應(yīng)自動化系統(tǒng)。因此，我們研發(fā)出了一種非常有效的磁珠IMAC分離產(chǎn)品來克服這些限制。
相關(guān)文獻(xiàn)
1. Jansen, J-C. (Editor). (2011). Protein Purification: Principles, High-Resolution Methods, and Applications. 3rd edition. Volume 151 of Methods of Biochemical Analysis. John Wiley & Sons, Hoboken, NJ
2. Bornhorst, J.A. and Falke, J.J. (2000). Purification of Proteins Using Polyhistidine Affinity Tags. Methods Enzymol. 326: 245-254.
3. Spriestersbach A, Kubicek J, Sch?fer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15. doi: 10.1016/bs.mie.2014.11.003. Epub 2015 May 4. PMID: 26096499.
4. Zhang C, Fredericks D, Longford D, Campi E, Sawford T, Hearn MT. Changed loading conditions and lysate composition improve the purity of tagged recombinant proteins with tacn-based IMAC adsorbents. Biotechnol J. 2015 Mar;10(3):480-9. doi: 10.1002/biot.201400463. Epub 2014 Oct 31. PMID: 25303209.
5. Pina AS, et al. (2014) Affinity tags in protein purification and peptide enrichment: An overview. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) 1129: 147-168.
6. Young CL, et al. (2012) Recombinant protein expression and purification: A comprehensive review of affinity tags and microbial applications. Biotechnol J 7(5): 620-634.
