產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
硼酸鹽親和磁珠
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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EC101 |
BcMag? 硼酸鹽基磁珠 |
250 mg |
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EC102 |
BcMag?硼酸鹽基磁珠 |
500 mg |
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產(chǎn)品屬性 |
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組成 |
間氨基苯基硼酸鹽連接的二氧化硅包覆磁珠 |
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磁珠大小 |
直徑5μm |
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磁力大小 |
40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5g/ml |
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狀態(tài) |
凍干粉 |
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結(jié)合能力 |
~2μmol硼酸鹽/mg磁珠 |
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存儲 |
收到后，儲存在4C° |
親和純化法是分離生物化合物的常用方法。其中，硼酸鹽親和層析是一種非常獨特的純化技術(shù)，因為在基質(zhì)上連接的配體（間氨基苯基硼酸），在pH 8-9下可以特異性和可逆性地結(jié)合，含有順式二醇鄰二醇化合物的物質(zhì)，并在pH 3-4條件下，在含有山梨醇的緩沖液中將其分離出去（圖1）。硼酸鹽親和樹脂可以從復(fù)雜生物樣品（如人血清）中有效富集含順二醇化合物（如醇類、核苷、核苷酸、核酸、碳水化合物、糖蛋白和酶）的有效實驗工具。盡管目前有大量的基于硼酸鹽親和性質(zhì)的不同材質(zhì)產(chǎn)品（如純化柱）可用，但這些產(chǎn)品存在操作程序繁瑣、耗時，并且無法處理非常微小體積的樣品（如癌細(xì)胞靶向和單細(xì)胞分析）等缺點。我們開發(fā)了一種全新的、有效的磁力親和系統(tǒng)來克服這些限制。
BcMagTM Boronate Affinity Magnetic Beads是均勻的，二氧化硅包裹氧化鐵的超順磁珠，表面連接有高密度硼酸基團。該磁珠作為固體材料，可以完美地用于含順二醇化合物的各種親和純化。由于其含有磁性，磁性材料可以很容易地適應(yīng)高通量分析的自動化系統(tǒng)。
操作流程
親和純化操作方法非常簡單（圖1）。1.將磁珠直接添加到樣品中。2.吹吸或旋渦混勻，以捕獲目標(biāo)生物分子。3.從樣品中用磁力分離磁珠。4.洗滌磁珠，以去除非特異性結(jié)合的分子。5.洗脫目標(biāo)分子。這款便于操作的磁珠顯著改善了實驗結(jié)果，其對小體積樣本的操作結(jié)果，普遍優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)滴柱法和分批法。
特點及優(yōu)勢
l 操作簡單，易于使用
l 極低的非特異性結(jié)合
l 非常高的結(jié)合容量和在溫和條件下洗脫結(jié)合的含有鄰位二醇基的分子
l 易于使用
l 可靠的，可重復(fù)性的實驗結(jié)果
l 性價比高：無需純化柱、過濾器和費力的重復(fù)移液過程
l 適用于高通量：與許多不同的自動化液體處理系統(tǒng)兼容
操作協(xié)議
使用者需準(zhǔn)備材料
· Binding/Wash Buffer: 50 mM HEPES, pH 8.5
提示：對于某些糖蛋白，向Binding/Wash Buffer中添加20-50 mM Mg2+，可以提高磁珠對它的結(jié)合能力。但是，這種方式也可能會導(dǎo)致更高的非特異性結(jié)合。因此，我們建議進(jìn)行滴定以優(yōu)化Mg2+的濃度。
· Elution Buffer:100 mM 山梨醇, 50 mM HEPES, pH 8.5
磁力分離器
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Item |
Source |
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離心管式磁力分離器
** 根據(jù)實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號的磁力分離器 |
· BcMag? separator-2可以容納兩個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01); · BcMag? separator-6可以容納六個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02); · BcMag? separator-24可以容納24個單獨的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03); · BcMag? separator-50可以容納一個單獨的50 ml離心管，一個15ml的離心管，以及四個1.5ml離心管(Cat.# MS-04); |
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BcMag 96孔磁力分離器. |
· BcMag 96-孔磁力分離器(單面) 可與96孔PCR板和96孔微孔板或其他型號離心板兼容使用 (Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調(diào)式單通道和多通道移液器 |
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實驗過程
重要提示：
l 以下方案是糖蛋白純化的實例。強烈建議在實驗過程中進(jìn)行滴定優(yōu)化，以確定每個實驗中應(yīng)用的磁珠數(shù)量。該協(xié)議可以相應(yīng)地放大和縮小。
l 不要使用含有有機溶劑的緩沖液。
A.磁珠的準(zhǔn)備
1.用Binding/Wash Buffer將磁珠重新懸浮至50mg/ml。
l 提示：分液前將磁珠混勻是非常重要的步驟，不要讓混勻的磁珠靜置超過兩分鐘，使用時每兩分鐘混勻一次磁珠
2.向試管中加入適量的磁珠，將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當(dāng)磁珠完全沉淀時，
去除上清液。
3.取下試管，用10倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。將試管在室溫下放
置2-3分鐘。再將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當(dāng)磁珠完全沉淀時，去除上清液。
4.重復(fù)步驟3一次。
5.取下試管，用10倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。將試管放在磁力分
離器上1-3分鐘。當(dāng)磁珠完全沉淀時，去除上清液。
6.重復(fù)步驟5一次。
7.用1倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。
B.樣品的結(jié)合技清洗
1.用15倍體積的Binding/Wash Buffer稀釋樣品。
2.將清洗過的磁珠添加到稀釋樣品中，用移液器吹吸將磁珠充分混合，并在室溫下輕輕震動10分鐘。
3.將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當(dāng)磁珠完全沉淀時，去除上清液。
4.從磁力分離器中取出試管，并用15倍體積的Binding/Wash Buffer洗滌磁珠。
5.重復(fù)步驟3-4，直到280nm處的吸光度接近0.001。
6.用1倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。
C.洗脫
1.從磁力分離器上取下試管
2.用10-20μl的 Elution Buffer重新懸浮磁珠，通過上下吹吸移液20-30次洗脫目標(biāo)生物分子。
3.將試管放置在磁力分離器上1-3分鐘，并將含有洗脫蛋白的上清液轉(zhuǎn)移到新試管中。
D.問題排除
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問題 |
可能原因 |
建議 |
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回收率低 |
Binding buffer或者樣品中的pH 值不在 8.0–8.5范圍內(nèi). |
檢查結(jié)合緩沖液和樣品pH值，確保其在8.0–8.5范圍內(nèi) |
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不結(jié)合 |
一些特異性糖基化蛋白與磁珠結(jié)合性不好。 |
向結(jié)合緩沖液中添加額外的最佳濃度的Mg2+ |
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非特異性結(jié)合 |
l 添加到樣品中的磁珠過多 l 清洗不夠充分 l 樣品中含有糖類，或非目標(biāo)分子的含有鄰二醇基團的分子。 |
· 優(yōu)化樣品與磁珠的添加比例 · 洗滌樣品直至280nm處的吸光度接近0.001。 · 增加Binding/Wash Buffer中的NaCl濃度 · 運行PD-10純化柱以除去低分子量多糖。 |
