產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
鏈酶親和素磁珠
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MMI 105 |
BcMag? 鏈酶親和素磁珠 |
5ml |
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MMI 106 |
BcMag? 鏈酶親和素磁珠 |
10ml |
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如需大量訂購，請聯(lián)系我們報價！ |
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產(chǎn)品屬性 |
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磁珠大小 |
直徑~ 2.5 μm |
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磁珠密度 |
~10 x 107 beads/mg ( 2.5μm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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濃度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.01% NaN3) |
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結合能力 |
生物素化BSA / 每毫升磁珠 |
>1mg/ml |
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生物素化單鏈核苷酸 |
~ 2,000 pmoles /ml |
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儲存 |
室溫運輸，4℃儲存. 不可冷凍 |
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本款磁珠是一種高度均勻的超順磁性磁珠，表面鏈接有高密度、高純度（>97%）的鏈霉親和素。磁珠是以納米級超順磁性氧化鐵為核心，由高純度二氧化硅作為外殼包裹，確保氧化鐵不會發(fā)生浸出問題。這款磁珠經(jīng)過專門設計和測試，可用于免疫沉淀、細胞分選以及從細胞裂解物或雜交反應中快速捕獲目標分子，如DNA、RNA、抗體或蛋白質等。
鏈霉親和素（親素多倍體）和生物素之間表現(xiàn)出的相互作用，是已知的最高非共價相互作用之一。抗生物素、鏈霉親和素、單體抗生物素及其類似物已成為探針和親和配體的有力工具，廣泛應用于生化分析、疾病診斷、親和純化和藥物遞送。鏈霉親和素是一種四聚體生物素結合蛋白，來源于親和素鏈霉菌，分子質量為60000道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物結構，pI值較低，非特異性結合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測系統(tǒng)的理想選擇試劑。
特點及優(yōu)勢
鏈霉親和素-生物素結合系統(tǒng)的優(yōu)勢和益處
l 極高的親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物素結合親和力，具有KD～
10?14米。
l 高穩(wěn)定性：生物素結合復合物具有良好的穩(wěn)定性，可抵抗極端pH值、溫度（2°C和
40°C）、極端的有機溶劑環(huán)境、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如SDS）和
蛋白水解酶。
l 突出的選擇性和特異性：生物素和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，可極大降
低非特異性結合概率。
l 高靈敏度：高穩(wěn)定性和特異性確保了極高的檢測靈敏度。
l 靈活性：生物素體積小的特點和顯著的穩(wěn)定性被證明非常適用于結合各種分子，例如
合成聚合物、熒光團、與小分子或生物分子中的特定位置結合，從而對共軛生物分子的結構和功能施加最小的干擾。
使用鏈霉親和素磁珠的優(yōu)點和益處
l 快速、簡單、一步式的高通量操作過程：不需要離心柱或過濾器，或費時費力的重復移液或離心（圖1）
l 極高的結合能力
l 非常低的非特異性結合率
l 可根據(jù)需要調整反應體積的大小，適用于自動化操作
操作協(xié)議
所需耗材
l Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4
l 磁力分離器（適用于手動操作）：根據(jù)實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號的磁力分離器：
BcMag? separator-2可以容納兩個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6可以容納六個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24可以容納24個單獨的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50可以容納一個單獨的50 ml離心管，一個15ml的離心管，以及四個1.5ml離心管(Cat.# MS-04);
BcMag? separator-96 可以配合96 ELISA板和PCR板使用 (Cat.#MS-05).
操作過程
提示
l 一下操作過程是一個通用的親和純化操作。為了獲得最佳結果，每個用戶都應該根據(jù)所需要純化的目標蛋白確定最佳工作條件。
l 我們強烈建議用戶使用滴定法，根據(jù)粗樣品中目標生物素化分子的濃度（基于磁珠結合能力），優(yōu)化每次使用中添加的磁珠數(shù)量。使用過多的磁珠會導致過高的背景，而使用磁珠的量過少會導致產(chǎn)量降低。
1. 將最佳添加量的磁珠轉移到離心管中。將離心管放在磁力分離器上1-3分鐘，當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
2. 取下試管，用5倍體積的PBS buffer通過渦漩清洗磁珠30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
3. 重復步驟2兩次。
4. 向含有目標分子的粗樣品中加入洗滌過的磁珠，并在室溫或所需溫度下培養(yǎng)1-2小時（溫度越低，培養(yǎng)時間越長）。
提示：強烈建議進行滴定實驗以優(yōu)化培養(yǎng)時間。因為較長時間的孵化可能會導致背景過
高。
5. 用5倍磁珠體積的PBS buffer或1M NaCl徹底清洗珠（可多次清洗），直到洗脫液在280 nm
處吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可能會降低非特異性背景。例如，向
洗滌緩沖液中添加NaCl（濃度為1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X-
100或吐溫20。
問題和解決方案
l 如何打破生物素和鏈霉親和素之間的結合？
生物素和鏈霉親和素之間的化學鍵結合力非常強。但它可以在變性條件下斷裂。許多應
用不需要從鏈霉親和素中分離生物素。但是，如果用戶需要將生物素與鏈霉親和素分離，請遵循以下建議：
1. 蛋白質或者抗體
為了從磁珠中洗脫結合的生物素化蛋白質或抗體，可向磁珠中添加適量的洗脫緩沖液（0.1 M
甘氨酸HCl，pH 2.5），在室溫下培養(yǎng)0.5-5分鐘，通過磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉移到新試管中。通過添加1/10體積的中和緩沖液（1.0 M Tris-HCl，pH 9.0），立即將上清液中和至pH 7.0。
2.DNA
由于洗脫較困難，不推薦使用長鏈核酸作為生物素化探針進行洗脫。對于短的生物素化
核酸洗脫，用戶可以嘗試以下方法：
A. 為了從磁珠中洗脫結合的生物素化低聚物，添加適量的洗脫緩沖液（10mM EDTA，
pH 8.2，95%甲酰胺），在65℃下培養(yǎng)2分鐘。
B. 通過磁力分離器清除磁珠，并將上清液轉移到新試管中。
l 如何從磁珠中洗脫結合的非生物素化樣品？
1.蛋白質或者抗體
如果非生物素化的蛋白質或抗體與生物素化的抗體或蛋白質相互作用，則添加適量的洗
脫緩沖液（0.1 M甘氨酸-HCl，pH 2.5），在室溫下培養(yǎng)30秒-5分鐘，通過磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉移到新試管中。通過添加1/10體積的中和緩沖液（1.0 M Tris-HCl，pH9.0），立即將上清液中和至pH7.0。
2.DNA或者RNA
生物素化DNA或RNA是一種短寡聚體探針。可通過添加適量d2H2O并在65-70℃下加熱3-5分鐘來洗脫結合的非生物素化DNA或RNA。通過磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉移到新試管中。生物素化的DNA或RNA是大片段時，可通過添加適量d2H2O并在95℃下加熱3-5分鐘來洗脫結合的非生物素化DNA。通過磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉移到新試管中。
