產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
可分離式鏈酶親和素磁珠
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MMI 107 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
2ml |
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MMI 108 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
5ml |
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MMI 109 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
10ml |
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如需大量訂購，請聯(lián)系我們報價！ |
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產(chǎn)品屬性 |
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磁珠大小 |
直徑~ 2.5 μm |
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磁珠密度 |
~10 x 107 beads/mg ( 2.5μm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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濃度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.01% NaN3) |
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結(jié)合能力 |
生物素化BSA / 每毫升磁珠 |
>1mg/ml |
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生物素化單鏈核苷酸 |
~ 2,000 pmoles /ml |
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儲存 |
室溫運輸，4℃儲存. 不可冷凍 |
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BcMag? Cleavable Streptavidin Magnetic Beads是表面覆蓋有高純度（>97%）鏈酶親和素的二氧化硅基質(zhì)的超順磁性磁珠。由于鏈酶親和素通過內(nèi)置的可切割二硫鍵連接物（圖1）與磁珠連接，因此，可用還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）從磁珠上切割并分離出鏈酶親和素-生物素化分子的復(fù)合物，而不需要像親和純化一樣，在純化后使用苛刻的洗脫試劑（如8M胍或SDS洗滌劑）洗脫目標(biāo)產(chǎn)物（圖1）。這款磁珠經(jīng)過專門設(shè)計和測試，可用于免疫沉淀、細胞分選以及從細胞裂解物或雜交反應(yīng)中快速捕獲目標(biāo)分子，如DNA、RNA、抗體或蛋白質(zhì)等。
鏈霉親和素和生物素之間表現(xiàn)出的相互作用，是已知的最高非共價相互作用之一?？股锼?、鏈霉親和素、單體抗生物素及其類似物已成為探針和親和配體的有力工具，廣泛應(yīng)用于生化分析、疾病診斷、親和純化和藥物遞送。鏈霉親和素是一種四聚體生物素結(jié)合蛋白，來源于親和素鏈霉菌，分子質(zhì)量為60000道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物結(jié)構(gòu)，pI值較低，非特異性結(jié)合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測系統(tǒng)的理想選擇試劑。
特點及優(yōu)勢
鏈霉親和素-生物素結(jié)合系統(tǒng)的優(yōu)勢和益處
l 極高的親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物素結(jié)合親和力，具有KD～
10?14米。
l 高穩(wěn)定性：生物素結(jié)合復(fù)合物具有良好的穩(wěn)定性，可抵抗極端pH值、溫度（2°C和
40°C）、極端的有機溶劑環(huán)境、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如SDS）和
蛋白水解酶。
l 突出的選擇性和特異性：生物素和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，可極大降
低非特異性結(jié)合概率。
l 高靈敏度：高穩(wěn)定性和特異性確保了極高的檢測靈敏度。
l 靈活性：生物素體積小的特點和顯著的穩(wěn)定性被證明非常適用于結(jié)合各種分子，例如
合成聚合物、熒光團、與小分子或生物分子中的特定位置結(jié)合，從而對共軛生物分子的結(jié)構(gòu)和功能施加最小的干擾。
使用鏈霉親和素磁珠的優(yōu)點和益處
l 容易從磁珠上洗脫出生物素化分子--鏈霉親和素的復(fù)合物
l 快速、簡單、一步式的高通量操作過程：不需要離心柱或過濾器，或費時費力的重復(fù)移液或離心
l 極高的結(jié)合能力
l 非常低的非特異性結(jié)合率
l 可根據(jù)需要調(diào)整反應(yīng)體積的大小，適用于自動化操作
操作協(xié)議
所需耗材
l Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4
l 磁力分離器（適用于手動操作）：根據(jù)實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號的磁力分離器：
BcMag? separator-2可以容納兩個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6可以容納六個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24可以容納24個單獨的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50可以容納一個單獨的50 ml離心管，一個15ml的離心管，以及四個1.5ml離心管(Cat.# MS-04);
BcMag? separator-96 可以配合96 ELISA板和PCR板使用 (Cat.#MS-05).
操作過程
提示
l 一下操作過程是一個通用的親和純化操作。為了獲得最佳結(jié)果，每個用戶都應(yīng)該根據(jù)所需要純化的目標(biāo)蛋白確定最佳工作條件。
l 我們強烈建議用戶使用滴定法，根據(jù)粗樣品中目標(biāo)生物素化分子的濃度（基于磁珠結(jié)合能力），優(yōu)化每次使用中添加的磁珠數(shù)量。使用過多的磁珠會導(dǎo)致過高的背景，而使用磁珠的量過少會導(dǎo)致產(chǎn)量降低。
1. 將最佳添加量的磁珠轉(zhuǎn)移到離心管中。將離心管放在磁力分離器上1-3分鐘，當(dāng)磁珠完全沉淀時，去除上清液。
2. 取下試管，用5倍體積的PBS buffer通過渦漩清洗磁珠30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，當(dāng)磁珠完全沉淀時，去除上清液。
3. 重復(fù)步驟2兩次。
4. 向含有目標(biāo)分子的粗樣品中加入洗滌過的磁珠，并在室溫或所需溫度下培養(yǎng)1-2小時（溫度越低，培養(yǎng)時間越長）。
提示：強烈建議進行滴定實驗以優(yōu)化培養(yǎng)時間。因為較長時間的孵化可能會導(dǎo)致背景過
高。
5. 用5倍磁珠體積的PBS buffer或1M NaCl徹底清洗珠（可多次清洗），直到洗脫液在280 nm
處吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可能會降低非特異性背景。例如，向
洗滌緩沖液中添加NaCl（濃度為1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X-
100或吐溫20。
6.二硫鍵的切割
提示：由于配體之間的構(gòu)象不同，用戶應(yīng)確定最佳工作條件，如還原劑、pH值和溫度，以切割單個配體的二硫鍵。以下是從磁珠上切割共軛的GFP蛋白的示例。
1）在140 mMβ-巰基乙醇或5 mM DTT（二硫蘇糖醇）中孵育磁珠（30mg/ml）。
a. 在 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 140 mM β-巰基乙醇條件下，室溫2小時或
者過夜孵育，或者在98℃條件下5分鐘。
b. 在100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 5mM DTT條件下，室溫2小時或者過夜孵
育，或者在98℃條件下5分鐘。
