產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
一步法RNA清除試劑盒
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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AU101 |
BcMag ? 一步法RNA清除試劑盒 |
1ml |
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AU102 |
BcMag ? 一步法RNA清除試劑盒 |
3ml |
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配方：液體成分（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，50%甘油）
活性：1μl磁珠將在37°C下于15分鐘內(nèi)在50 mM Tris-HCl（pH 8.0）中，可將0.5μg酵母RNA（Sigma，目錄號(hào)#R9001）降解。
裝運(yùn)：在常溫環(huán)境下裝運(yùn)。收到后，將核酸酶磁珠保存在-20°C。等分試樣以避免反復(fù)冷凍和解凍。
這種一步法RNA去除試劑盒為從樣品中快速去除RNA提供了一種方便可靠的方法。該試劑盒包括一種獨(dú)特的酶組合，可快速有效地降解RNA，用于各種下游應(yīng)用。
簡(jiǎn)介
一步法RNA清除試劑盒使用核糖核酸酶A固定化磁珠，僅需單步操作就可從樣品中有效去除RNA。RNase A是一種源自牛胰腺的核糖核酸酶，它是一種分子量為13.7 kDa的單鏈多肽。RNase A可將核糖核酸（RNA）非表面降解為較小的成分。用RNase A固定的磁珠可以有效地從生物樣品中去除RNA，由于核酸酶穩(wěn)定且與磁珠共價(jià)綴合，因此溶液中不殘留核酸酶。
應(yīng)用程序
? 用于目標(biāo)分析
? 質(zhì)粒和基因組DNA制備
? 通過流式細(xì)胞術(shù)和碘化丙啶（PI）染色進(jìn)行細(xì)胞周期分析
? 從重組蛋白制劑中去除RNA
? 核糖核酸酶保護(hù)測(cè)定。與RNase T1結(jié)合使用
? 繪制DNA或RNA中的單堿基突變
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
l 高效的單管，無需純化過程（圖1）。
l 快速：在30分鐘內(nèi)可以處理96個(gè)樣品，且手動(dòng)時(shí)間小于10秒
l 在反應(yīng)結(jié)束后，回收的核酸酶磁珠可以重復(fù)使用
l 易于從反應(yīng)中分離核酸酶磁珠
l 良好的核酸酶結(jié)合穩(wěn)定性
l 性價(jià)比高：無需過濾柱、吸附管、操作簡(jiǎn)單、不需要有機(jī)試劑，僅需少量的離心管。
l 適用于高通量實(shí)驗(yàn)：與許多不同的自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)兼容。
工作流程圖
操作協(xié)議
A、 所需設(shè)備
A. 磁力架
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Item |
Source |
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離心管式磁力分離器
** 根據(jù)實(shí)驗(yàn)時(shí)生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號(hào)的磁力分離器 |
· BcMag? separator-2可以容納兩個(gè)單獨(dú)的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01); · BcMag? separator-6可以容納六個(gè)單獨(dú)的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02); · BcMag? separator-24可以容納24個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03); · BcMag? separator-50可以容納一個(gè)單獨(dú)的50 ml離心管，一個(gè)15ml的離心管，以及四個(gè)1.5ml離心管(Cat.# MS-04); |
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BcMag 96孔磁力分離器. |
· BcMag 96-孔磁力分離器(單面) 可與96孔PCR板和96孔微孔板或其他型號(hào)離心板兼容使用 (Blioclone, Cat#: MS-06) |
B、 實(shí)驗(yàn)過程
· 不要使用含有有機(jī)溶劑的緩沖液。
? 通常，根據(jù)RNA的濃度，將所需的磁珠直接添加到任何標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中。（1μl磁珠將消化10μg酵母RNA）。
表1工作條件
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條件 |
最優(yōu)條件 |
功能范圍 |
抑制作用 |
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溫度 |
60℃ |
15–70°C |
N/A |
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pH值 |
7.6 |
6.0–10.0 |
N/A |
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Zn2+ |
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是的 |
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Cu2+ |
N/A |
N/A |
是的 |
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0-100 mM NaCl |
優(yōu)先切割單鏈和雙鏈RNA以及RNA-DNA雜種中的RNA鏈。
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N/A |
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>300mmol氯化鈉 |
優(yōu)先切割單鏈RNA |
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鹽酸胍 |
N/A |
N/A |
4M+0.1M 2-巰基乙醇 |
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十二烷基硫酸鈉 |
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是的 |
1.震動(dòng)試劑瓶，使磁珠重新懸浮，直至完全混勻。
提示：分液前將磁珠混勻是非常重要的步驟，不要讓混勻的磁珠靜置超過兩分鐘，使用時(shí)每?jī)煞昼娀靹蛞淮未胖?
2.在反應(yīng)體系中加入適量的磁珠。
3.在1-2分鐘內(nèi)通，過移液器緩慢上下移液20-25次，將樣品與磁珠混合；或以2000 rpm
的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)樣品2分鐘。
4.在37℃下連續(xù)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)15分鐘。
5.將樣品板或樣品管放在磁力分離器上30秒或直到溶液澄清。（選項(xiàng)：以3500 rpm離心
45秒）
6.當(dāng)樣品板保持在磁力分離器上時(shí)，將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的板/管中，該樣本即可用于下游
應(yīng)用。
