產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
一步法DNA和RNA純化試劑盒
|
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
|
|
|
AH101 |
BcMag ? 一步DNA-RNA純化試劑盒 |
1ml |
|
|
|
AH102 |
BcMag ? 一步DNA-RNA純化試劑盒 |
5ml |
|
使用一步法DNA和RNA純化試劑盒可實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量的DNA/RNA純化。去除引物二聚體和游離核苷酸等雜質(zhì)。
簡(jiǎn)介
BcMag ? 一步法DNA和RNA純化試劑盒，可通過負(fù)相純化技術(shù)從待純化的DNA/RNA樣品中一步操作去除雜質(zhì)。雜質(zhì)包括DNA/RNA聚合酶、修飾酶、限制性內(nèi)切酶、連接酶、磷酸激酶、核酸酶、磷酸酶、蛋白質(zhì)、大多數(shù)洗滌劑、大多數(shù)熒光或非熒光染料、二價(jià)陽(yáng)離子如Ca2+、Mg2+、過量引物、二聚體、銜接子、DNA/RNA片段（<100-mer ssDNA）、游離dNTPs/NTPs及其類似物，包括放射性標(biāo)記的，生物素化和熒光衍生物。
該方案操作簡(jiǎn)單：僅需一管，一步，一分鐘（圖1）。將磁珠直接添加到待純化的DNA/RNA樣品中，通過渦旋或移液以捕獲和去除雜質(zhì)。渦旋/移液后，磁珠被磁力架捕獲，而上清液中含有純化的，可進(jìn)行下有反應(yīng)的樣品。磁珠適用于DNA/RNA片段，質(zhì)粒DNA和基因組DNA。
特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)
l 簡(jiǎn)單的過程：不用移液，一步，一管
l 超快純化過程：一分鐘可以完成純化
l 超高的純度和回收率：回收率> 90%
l 高效的清除效率：可以清除過量的引物 (<100 mers ssDNA),二聚體，接頭分子，鹽
如 Mg2+，洗滌劑，dNTPS,各種酶，以及熒光物質(zhì)。
l 無需純化柱，以及過濾器，不用費(fèi)力的反復(fù)移液吹吸，也不使用酒精。
l 高通量：可兼容多種不同的自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)
操作流程
A.用戶所需材料
l 18.2 MΩ.cm, 無DNase/Rnase的超純水
l Triton? X-100, Sigma, Catalog # T8787
l 其他
|
Item |
Source |
|
|
磁力分離器
**根據(jù)樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個(gè)單獨(dú)的50毫升離心管，1個(gè)單獨(dú)的15毫升離心管, 以及4個(gè) 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
|
|
|
BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
|
|
可調(diào)單通道和多通道移液器 |
|
|
|
擺斗離心機(jī) |
|
|
|
如果使用96孔PCR板/管，則需要添加項(xiàng)目 |
||
|
渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號(hào)的渦懸混合器。但是，時(shí)間和速度應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化，并且混合器應(yīng)滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉(zhuǎn)速 ≥ 2000 rpm |
||
|
Eppendorf? MixMate? |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
|
|
Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
|
|
Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24?×?1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
|
|
Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
|
|
1.5/2.0 mL 離心管 |
||
|
96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
||
|
PCR 板/管 **重要提示! 如果使用其他管或PCR板，確保PCR管或PCR板錐形部分底部的井徑必須≥2.5毫米。 |
||
B.實(shí)驗(yàn)步驟
重要提示！
l 以下過程是經(jīng)過優(yōu)化的用于高效純化10μl DNA樣品。如果應(yīng)用于其他體積的反應(yīng)條件，
則需要對(duì)操作步驟進(jìn)行優(yōu)化。
l 磁珠使用前，請(qǐng)先將磁珠徹底渦旋或震蕩懸浮，確保磁珠處于混勻狀態(tài)
l 不允許磁珠在靜置2分鐘后再進(jìn)行產(chǎn)品的使用
l 根據(jù)應(yīng)用，用戶應(yīng)根據(jù)表1選擇緩沖條件。例如，如果樣品不含去垢劑，則需要添加
1μL 1%Triton? X-100至10μL樣品（最終濃度為0.1%）中。
l 核酸定量：僅可使用熒光方法檢測(cè)，如qPCR、Qubit和Pico Green。
表一
|
DNA 片段清除 |
||||||
|
|
+ 0.1% Triton x-100, pH7.5 |
- 0.1% Triton x-100 pH7.5 |
+ 0.1% Triton x-100 pH 8.0 |
- 0.1% Triton x-100 pH 8.0 |
+ 0.1% Triton x-100 pH 8.8 |
- 0.1% Triton x-100 pH 8.8 |
|
dsDNA (100 bp) |
未清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
|
dsDNA (150 bp) |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
|
dsDNA (200 bp) |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
|
dsDNA (300 bp) |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
|
ssDNA 100 mer |
清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
|
dsDNA- 雙鏈 DNA; ssDNA- 單鏈 DNA上 述驗(yàn)證時(shí)通過下列條件完成的: 1. 10 mM Tris-HCl 含有或者不含有 0.1% triton (最終含量) 以及以下三個(gè)變量: pH 7.5, pH 8.0 和 pH 8.8 |
||||||
1. 添加5ul磁珠產(chǎn)品到10ul的DNA待純化樣品中。
2. 如果需要，可短暫的2500rpm離心30秒，使所有成分都處于試管底部
3. 徹底混勻1分鐘，通過緩慢的使用移液器吹吸25次（一分鐘時(shí)間）；或者2500 rpm
渦旋震蕩5分鐘。
4. 如果需要，可短暫的2500rpm離心30秒，使所有成分都處于試管底部
5. 將裝有樣品的試管放入磁力分離器中30秒，直到磁珠徹底被吸附到試管底部，上清
液變澄清為止。
6. 將試管保持在磁力分離器中，同時(shí)，將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的試管當(dāng)中，用于下
游實(shí)驗(yàn)。
C.故障排除
|
DNA回收率低 |
渦旋時(shí)間太長(zhǎng) 或者渦旋速度太快 |
· 減少渦旋時(shí)間或者速度 · 如果使用其他型號(hào)的渦旋混勻器，則渦旋時(shí)間和速度需要重新優(yōu)化 |
|
磁珠使用過多 |
徹底的懸浮磁珠，并準(zhǔn)確的加入磁珠的用量 |
|
|
樣品緩沖液未優(yōu)化 |
· 如果樣品中不含有去垢劑，向樣品中添加曲通拉X-100（最終濃度為0.1%） |
|
|
雜質(zhì)去除失敗 |
PCR 管或者PCR 板型號(hào)不對(duì) |
確保PCR 管或者PCR 板的底部圓錐形截面直徑≥2.5mm. |
|
渦旋的速度太慢或者渦旋時(shí)間太短 |
· 增加渦旋的速度或者渦旋時(shí)間 · 如果使用其他型號(hào)的渦旋混勻器，則渦旋時(shí)間和速度需要重新優(yōu)化. |
|
|
磁珠使用量太少 |
徹底的懸浮磁珠，并準(zhǔn)確的加入磁珠的用量 |
|
|
DNA片段有較強(qiáng)的二級(jí)結(jié)構(gòu) (<50bp dsDNA or < 100 mer ssDNA) |
通過95°C加熱2分鐘使樣品變性 |
|
|
有太多的引物，二聚體，銜接體，游離染料或者去垢劑 |
· 增加磁珠使用量 · 進(jìn)行第二次純化，按照相同的純化過程 |
