產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
一步法脫落細(xì)胞DNA純化試劑盒
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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AS101 |
BcMag ? 一步法脫落細(xì)胞DNA純化試劑盒 |
50 preps |
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AS102 |
BcMag ? 一步法脫落細(xì)胞DNA純化試劑盒 |
10 preps |
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組件 |
存儲(chǔ)條件 |
50preps，目錄號(hào)AS101 |
100 preps，目錄號(hào)AS102 |
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BcMag? U-DNA Beads |
4°C |
2.5 ml |
5.0 ml |
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10x Lysis Buffer (100mM Tris-HCl, PH 9.0) |
4°C |
0.6 ml |
1.2 ml |
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Proteinase K |
-20°C |
12.5 mg |
25 mg |
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DTT(1M) |
-20°C |
15.4 mg |
30.8 mg |
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Proteinase K Suspension Buffer |
4°C |
1.0 ml |
2.0 ml |
運(yùn)輸和儲(chǔ)存：根據(jù)上表，在收到商品時(shí)儲(chǔ)存試劑盒中各組分。
簡介
脫落細(xì)胞DNA是指從丟失的皮膚細(xì)胞和其他生物材料中收集的DNA，這些生物材料通常指手指、手掌、腳趾和腳掌上的指紋突起部位留在觸摸表面的脫落細(xì)胞。這一生物技術(shù)在盜竊、性暴力到謀殺等一系列刑事案件的取證中起著極為重要的作用。例如，在謀殺或性侵犯案件中，可以通過研究用于盜竊的車輛的方向盤，或在謀殺和性侵案件中的武器和衣物，來收集非常有價(jià)值的犯罪者的DNA證據(jù)。此外，從犯罪現(xiàn)場收集“脫落細(xì)胞DNA”以確定犯罪嫌疑人可能非常有價(jià)值，特別是在沒有其他類型的證據(jù)的情況下。
通常，DNA分析過程始于從法醫(yī)檢樣中提取DNA。DNA的提取和回收過程是DNA分析過程中最關(guān)鍵的一步。幾乎所有的實(shí)驗(yàn)都需要足夠數(shù)量的，經(jīng)過定量和定性的DNA才可以完成。因此在法醫(yī)鑒定中，DNA鑒定能否成功取決于現(xiàn)有DNA模板的可用性。所以，就需要更好的DNA提取回收方法，尤其是在處理含有微量DNA的脫落細(xì)胞樣本時(shí)。各種各樣的方法被用來增加證據(jù)DNA的數(shù)量和質(zhì)量。然而，由于提取方式的不同和定量方法的準(zhǔn)確性差異，DNA提取過程可能導(dǎo)致初始脫落細(xì)胞含有的DNA的20%至90%損失掉。而且，目前用于法醫(yī)DNA案件的純化技術(shù)耗時(shí)且過程繁瑣。
此外，對(duì)于使用純化柱進(jìn)行純化操作的方式很容易導(dǎo)致DNA丟失，從而使低拷貝或受損的脫落細(xì)胞樣本的分型實(shí)驗(yàn)失敗。因此，直接PCR擴(kuò)增法被提出作為避免脫落細(xì)胞樣本DNA丟失的方法之一。該技術(shù)不需要提取、定量和濃縮等步驟，可以最大程度保留生物樣本中的DNA。同時(shí)，可以最大程度減少不同的實(shí)驗(yàn)室員操作帶來的誤差和樣本處理過程中的DNA污染，并減少樣本操作過程的處理時(shí)間和成本。然而，許多DNA樣本需要直接從固體物質(zhì)上提取，如衣服、室內(nèi)裝潢材料、紙張、口香糖和煙頭等，但直接從這些固體上提取核酸，就會(huì)造成提取出的DNA攜帶高濃度的PCR抑制劑。Bioclone公司開發(fā)了一種全新的基于磁珠法的一步DNA純化系統(tǒng)，可以克服以上這些缺點(diǎn)。
BcMag? One step Touch DNA Direct Kit使用新型負(fù)相色譜磁珠，可以從大多數(shù)微量脫落細(xì)胞樣本中快速提純出更高質(zhì)量和更高回收率的DNA。這些樣本包括體液、污漬、體液拭子、脫落細(xì)胞、煙頭、毛囊、指甲刮屑、上皮細(xì)胞、咬痕、精液等掉落的生物體細(xì)胞DNA樣本等。經(jīng)過特殊設(shè)計(jì)的磁珠表面具有我們專有的表面化學(xué)功能基團(tuán)，一旦與樣品混合，可同時(shí)裂解細(xì)胞并捕獲PCR抑制劑（圖1）。
然后用磁力架去除磁珠-PCR抑制劑的復(fù)合物，同時(shí)保留在溶液中的純凈DNA可用于下游STR分析。本款核酸純化試劑盒提供了一種全新的快速簡單的DNA純化方法，只需一個(gè)試管，無需反復(fù)的溶液轉(zhuǎn)移，純化過程不需要載體RNA。同時(shí)，這種核酸提取方式還減少了DNA丟失的風(fēng)險(xiǎn)，以及提取緩沖液在傳統(tǒng)核酸提取的，結(jié)合-洗滌-洗脫程序中可能帶來的污染和DNA丟失風(fēng)險(xiǎn)。在將樣本完全裂解后，它能夠在不到15分鐘的時(shí)間內(nèi)處理96個(gè)樣品，實(shí)際手動(dòng)操作時(shí)間不會(huì)超過1分鐘。
圖2： 脫落細(xì)胞 DNA純化的原理和工作流程
1.向生物樣品中添加功能磁珠。
2.將樣品與磁珠和蛋白酶K混合并裂解細(xì)胞。
3.通過旋渦/移液吹吸方式對(duì)磁珠進(jìn)行混合，以捕獲PCR抑制劑。
4.用磁力架沉淀磁珠。
5.吸取含有純凈DNA的上清液
應(yīng)用方向
純化的DNA適用于敏感的下游應(yīng)用，如PCR、qPCR、單核苷酸多態(tài)性（SNP）、短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）基因分型、基因分型或新一代測(cè)序（NGS）。
特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)
l 快速高效的純化方案：無需液體轉(zhuǎn)移，只需一個(gè)試管，無需事先分離DNA，可直接用于放大實(shí)驗(yàn)的工作流程。
l 節(jié)約時(shí)間成本：可在不到一小時(shí)內(nèi)處理96個(gè)樣本。
l 最高的核酸回收率：提取過程中的DNA損失最小。
l 有效去除抑制劑（圖1）：多酚化合物、腐殖酸/黃腐酸、酸性多糖、鞣質(zhì)、黑色素、肝素、洗滌劑、牛仔布染料、二價(jià)陽離子，如Ca2+、Mg2+等。
l 性價(jià)比高：無需離心柱、過濾器、不用反復(fù)的重復(fù)移液和使用有機(jī)試劑。
l 可用于高通量實(shí)驗(yàn)：與許多不同的全自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)兼容。
本產(chǎn)品用于法醫(yī)學(xué)、人類鑒定和親子鑒定分子生物學(xué)應(yīng)用。本產(chǎn)品不適用于疾病診斷、預(yù)防或治療。
一般參考文獻(xiàn)
1. Van Oorschot, R., Jones, M. DNA fingerprints from fingerprints. Nature 387, 767 (1997).
2. Tang J, Ostrander J, Wickenheiser R, Hall A. Touch DNA in forensic science: The use of laboratory-created eccrine fingerprints to quantify DNA loss. Forensic Sci Int Synerg. 2019 Oct 23;2:1-16.
3. Jo-Anne Bright, Susan F. Petricevic. Recovery of trace DNA and its application to DNA profiling of shoe insoles, Forensic Science International,Volume 145, Issue 1, 2004,Pages 7-12
4. Tang J, Ostrander J, Wickenheiser R, Hall A. Touch DNA in forensic science: The use of laboratory-created eccrine fingerprints to quantify DNA loss. Forensic Sci Int Synerg. 2019 Oct 23;2:1-16.
