產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
發(fā)干DNA純化試劑盒
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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AD101 |
BcMag? 發(fā)干DNA純化試劑盒 |
50preps |
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AD102 |
BcMag? 發(fā)干DNA純化試劑盒 |
100preps |
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組件 |
存儲(chǔ)條件 |
目錄號(hào)#：AD101（50Preps） |
目錄號(hào)#：AD102（50Preps ） |
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BcMag? HO-DNA Beads |
4°C |
0. 5 ml |
1.0 ml |
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BcMag? Hair Pigment Removal Beads |
4°C |
0.3 ml |
0.6 ml |
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1x Lysis Buffer |
4°C |
5 ml |
10 ml |
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10x Binding buffer |
4°C |
1.5 ml |
3.0 ml |
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1x Elution Buffer |
4°C |
0.75 ml |
1.5 ml |
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Proteinase K |
-20°C |
10 mg |
20 mg |
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Proteinase K Suspension Buffer |
4°C |
0.5 ml |
1.0 ml |
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DTT |
-20°C |
75 mg |
150 mg |
運(yùn)輸和儲(chǔ)存：根據(jù)上表，在收到商品時(shí)儲(chǔ)存試劑盒中各組分。
簡(jiǎn)介
頭發(fā)在法醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中的意義
頭發(fā)是在犯罪現(xiàn)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)的常見(jiàn)證據(jù)，也是醫(yī)學(xué)研究調(diào)查中一種新的樣本類型。它在犯罪學(xué)研究中，可用于人口統(tǒng)計(jì)工作和基于DNA的分析研究。最有研究意義的DNA測(cè)序是對(duì)核DNA的短序列重復(fù)序列分析，但只有當(dāng)頭發(fā)根部和粘附組織存在時(shí)，這種研究方法才可能實(shí)現(xiàn)。
頭發(fā)在遺傳譜系中的優(yōu)勢(shì)
在法醫(yī)實(shí)驗(yàn)中，無(wú)根毛發(fā)占法醫(yī)樣品的大多數(shù)。因?yàn)轭^發(fā)本身的不溶性質(zhì)，其內(nèi)儲(chǔ)存的DNA可以保存近百年。而且以其為樣本提取的DNA比使用骨骼和牙齒樣本提取出的DNA更不易受到微生物污染影響。值得注意的是，一根頭發(fā)就是一個(gè)單獨(dú)的生物體樣本。因此，不同樣本混合，是法醫(yī)學(xué)研究中DNA研究的一個(gè)主要障礙，因?yàn)樘峒兂龅?/span>DNA 可能不是由同一個(gè)個(gè)體頭發(fā)產(chǎn)生的DNA。
頭發(fā)的結(jié)構(gòu)及其DNA
毛囊和發(fā)干（無(wú)根發(fā)干，圖1）是可以用于提取和純化DNA的頭發(fā)的兩個(gè)部位。毛囊可以提取出細(xì)胞核DNA（nuDNA）和線粒體DNA（mtDNA）。然而，發(fā)干通常被認(rèn)為只含有線粒體DNA，可能沒(méi)有核DNA存在。但是，在犯罪現(xiàn)場(chǎng)采集到的頭發(fā)樣本中，無(wú)毛囊的脫落頭發(fā)可能占樣本總量的90%。這些脫落的毛干可能經(jīng)歷了角質(zhì)化、硬化和誘導(dǎo)細(xì)胞核破裂的一些列過(guò)程。但是，對(duì)于未清洗的頭發(fā)，由于發(fā)干表面有組織脫落的細(xì)胞粘附在其上面，因此其具有較多的DNA可提取出，這可能是發(fā)干提取中核DNA的主要來(lái)源。盡管如此，據(jù)研究表明，在無(wú)根的毛干中仍保留一些核DNA，盡管數(shù)量很少，質(zhì)量也有很大差異。另一方面，發(fā)干中線粒體DNA也可以被完整的提純出來(lái)，用于下游應(yīng)用。
線粒體的DNA測(cè)序
人類頭發(fā)中線粒體DNA分析，可用于嫌疑人的確認(rèn)。然而，與核DNA（nuDNA）不同，個(gè)體的線粒體DNA都是遺傳自母系核酸系統(tǒng)，因此缺乏選擇性潛力。除非在一些罕見(jiàn)的情況下，父本核酸體系中的線粒體DNA才會(huì)遺傳到子代核酸中，否則，線粒體DNA都是從母親一側(cè)繼承的。因此，線粒體基因測(cè)序無(wú)法將祖母與她的女兒或?qū)O子區(qū)分開(kāi)來(lái)，只有對(duì)細(xì)胞核DNA的測(cè)序才能實(shí)現(xiàn)這種區(qū)分。但是，在調(diào)查各種毛發(fā)類樣本時(shí)，線粒體DNA測(cè)序也可以作為物種鑒定依據(jù)，提供重要信息。因?yàn)椴⒎撬械拿l(fā)樣本都是屬于人類的，所以用這種方法可以識(shí)別出脫落毛發(fā)的動(dòng)物。
用于短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）分型的NuDNA（核DNA）
通常，法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室將首先會(huì)檢查頭發(fā)是否存在發(fā)根。如果樣本缺乏發(fā)根部位，法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室通常不會(huì)對(duì)其處理或將樣本進(jìn)行線粒體DNA提取，然后做線粒體DNA（mtDNA）測(cè)序，這在歷史上被證明比用發(fā)干提取核DNA有更好的結(jié)果。但是如果發(fā)干中存在核DNA（nuDNA），則可以使用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行犯罪嫌疑人識(shí)別，如STR分型。最近，Brandhagen等人研究發(fā)現(xiàn)，盡管發(fā)干中核DNA已經(jīng)片段化，但仍可以從脫落的頭發(fā)中提取出[1]。令人驚訝的是，研究證明發(fā)干中核DNA占總DNA的大部分，這就消除了發(fā)干中只有線粒體DNA可以從無(wú)根毛發(fā)中回收的假設(shè)，并證明了與線粒體DNA相比，在發(fā)干中核DNA是豐富的。因此，該研究表明了，死亡的毛發(fā)中存在細(xì)胞核DNA，但是使用傳統(tǒng)核酸提取技術(shù)無(wú)法提取出來(lái)，但是證明了，細(xì)胞核DNA是大量存在，但DNA質(zhì)量較差。
優(yōu)化毛干DNA提取工藝
DNA提取是發(fā)干法醫(yī)分析的第一步。在一根無(wú)根毛發(fā)中只能提取出皮克級(jí)別的超短DNA片段。由于實(shí)際問(wèn)題和技術(shù)原因，使用不同的提取方法，優(yōu)化條件從不同樣品中，最大程度的提高收集DNA的產(chǎn)量和純度至關(guān)重要。因此，尋找一種高效、穩(wěn)定和簡(jiǎn)單的提取DNA和擴(kuò)增nuDNA靶點(diǎn)的技術(shù)是毛干DNA提取和擴(kuò)增的主要挑戰(zhàn)。因此，研發(fā)出一種從發(fā)干中提取DNA并且能去除DNA污染的簡(jiǎn)單方法，同時(shí)可以顯著縮短分析時(shí)間，這對(duì)法醫(yī)和人口研究是很有價(jià)值的。
BcMag? Hair Shaft DNA Purification Kit使用磁珠和優(yōu)化的脫礦質(zhì)緩沖液，被設(shè)計(jì)用于從單根頭發(fā)樣本中高效、有序地提取出總核酸。純化的基因組DNA具有最高的完整性，可用于各種下游應(yīng)用，如qPCR、STR等。
發(fā)干DNA純化的工作流程和結(jié)果。
1.在95°C下裂解頭發(fā)2小時(shí)。
2.添加磁珠以結(jié)合DNA。
3.清洗磁珠
4.從磁珠中洗脫DNA
參考文獻(xiàn)
1. Brandhagen MD, Loreille O, Irwin JA. Fragmented Nuclear DNA Is the Predominant Genetic Material in Human Hair Shafts. Genes. 2018 Dec;9(12):640.
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7. Brandhagen MD, Loreille O, Irwin JA. Fragmented Nuclear DNA Is the Predominant Genetic Material in Human Hair Shafts. Genes. 2018 Dec;9(12):640.
8. Parker GJ, Leppert T, Anex DS, Hilmer JK, Matsunami N, Baird L, Stevens J, Parsawar K, Durbin-Johnson BP, Rocke DM, Nelson C. Demonstration of protein-based human identification using the hair shaft proteome. PloS one. 2016 Sep 7;11(9):e0160653.
