產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
高效的FFPE和FNA DNA提取試劑盒
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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AJ101 |
BcMag ? 一步法FFPE和FNA DNA純化試劑盒 |
50 preps |
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AJ102 |
BcMag ? 一步法FFPE和FNA DNA純化試劑盒 |
100 preps |
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組分 |
存儲(chǔ)條件 |
50 preps，貨號(hào)#AJ101 |
100 preps，貨號(hào)#AJ102 |
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BcMag? U-DNA Beads |
4°C |
2.5 ml |
5.0 ml |
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10x Lysis Buffer (100mM Tris-HCl, PH 9.0) |
4°C |
0.6 ml |
1.2 ml |
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Proteinase K |
-20°C |
12.5 mg |
25 mg |
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DTT(1M) |
-20°C |
15.4 mg |
30.8 mg |
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Proteinase K Suspension Buffer |
4°C |
1.0 ml |
2.0 ml |
運(yùn)輸和儲(chǔ)存：根據(jù)下表，在收到貨物時(shí)儲(chǔ)存各組分。
簡(jiǎn)介
福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織和細(xì)針穿刺活檢（FNA）是病理學(xué)家使用的檔案組織樣本的流行來源。它可以在室溫下長(zhǎng)期保存組織樣本，非常方便。因?yàn)?/span>這種組織保存方式是標(biāo)準(zhǔn)保存方法，所以它也是生物學(xué)研究材料的主要來源。分子腫瘤學(xué)診斷的關(guān)鍵步驟之一是獲得高質(zhì)量的基因組DNA。FFPE或FNA衍生的DNA突變分析有助于診斷大多數(shù)實(shí)體瘤疾病。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR），Kristen Ras基因（KRAS），神經(jīng)母細(xì)胞瘤Ras基因（NRAS）以及使用FFPE DNA進(jìn)行顯著突變基因熱點(diǎn)檢測(cè)的，新一代測(cè)序等研究對(duì)于確定特定的癌癥治療至關(guān)重要。
然而，從這些組織中提取出 基因組DNA是一個(gè)艱難的挑戰(zhàn)，主要是由于福爾馬林的固定，會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)和DNA之間的交聯(lián)以及不同的DNA交鏈。因此， DNA經(jīng)常被廣泛破壞和片段化。碎裂程度取決于組織類型，樣品存放時(shí)間和特定的固定程序。這些特性可能會(huì)對(duì)下游應(yīng)用產(chǎn)生影響，其中許多應(yīng)用都需要使用PCR。因此，從FFPE組織中提取DNA必須成功提取出這些高度片段化的基因組DNA，并需要解決福爾馬林固定產(chǎn)生反向交聯(lián)。
為了提取足夠的基因組DNA（gDNA）進(jìn)行下游分析，幾種市售的核酸提取試劑盒需要至少10μm的起始生物檢測(cè)材料。由于這些生物檢材都是從人類患者那里獲得的，因此提取試劑盒優(yōu)劣至關(guān)重要，因?yàn)樗?/span>規(guī)定了所需生物檢材的大小以及對(duì)每個(gè)FFPE塊進(jìn)行的分析次數(shù)。而一些存儲(chǔ)的組織由于太小而無法滿足這種條件，因此這種限制就降低了可行應(yīng)用的次數(shù)。此外，使用這些試劑盒進(jìn)行DNA提取可能很耗時(shí)，“結(jié)合-洗滌-洗脫”過程也可能會(huì)導(dǎo)致大量DNA丟失。
BcMag ? 一步法FFPE＆FNA DNA純化試劑盒旨在從2μm-5μm福爾馬林固定，石蠟包埋（FFPE）組織或細(xì)針穿刺活檢樣品中有效且有序的提取出總核酸。該試劑盒使用我們獨(dú)特的磁珠，在水性緩沖液中有效去除FFPE組織樣品中的石蠟，同時(shí)對(duì)組織進(jìn)行再裂解。該過程清除了易燃和有氣味的二甲苯或d-檸檬烯，以及從通常用于脫蠟的，且難以看到的組織顆粒中殘留的有機(jī)溶劑。此外，該試劑盒是獨(dú)特的，因?yàn)樗膶Ｓ写胖榭梢詢H需一步從樣品中去除PCR抑制劑，而無需DNA提取過程。
圖1：細(xì)胞裂解物清除和PCR抑制劑去除
因此，它增加了核酸的回收率，避免了傳統(tǒng)DNA提取技術(shù)中，使用的耗時(shí)的“結(jié)合-洗滌-洗脫”過程引起的DNA損失。樣品裂解后，簡(jiǎn)單的一步法純化技術(shù)非常適合同時(shí)處理>96個(gè)樣品，并在不到30分鐘內(nèi)完成DNA純化。純化的基因組DNA具有極高的完整性，可用于各種下游應(yīng)用，例如qPCR，突變篩選，微陣列分析，測(cè)序，Southern印跡和SNP分析。
一步法FFPE和FNA DNA分離的工作流程和結(jié)果
1.為了裂解樣品，向樣品中加入功能磁珠和蛋白酶K，并在65°C下孵育。
2.將樣品渦旋/吹吸，以便于磁珠以捕獲PCR抑制劑。
3、用磁力架將磁珠與樣品分離。
4. 吸出含有純凈DNA/RNA的上清液。
圖2：一步法FFPE和FNA DNA 純化的工作流程
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)：
? 快速有效的純化方案：無需事先進(jìn)行DNA分離，即可用于直接工作流程，無需液體轉(zhuǎn)移和一管。
? 超快：在不到一小時(shí)內(nèi)處理96個(gè)樣品。
? 最高的核酸回收率：提取過程中DNA的損失最小
? 有效去除抑制劑：多酚化合物、腐殖酸/富里酸、酸性多糖、單寧、黑色素、肝素、洗滌劑、牛仔布染料、二價(jià)陽離子如Ca2+、Mg2+等。
? 高度改進(jìn)的活性石蠟去除方法：不需要二甲苯等有毒有機(jī)溶劑
? 成本效益：消除了色譜柱，過濾器，費(fèi)力的重復(fù)移液和有機(jī)試劑。
? 高通量：與許多不同的自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)兼容。
